Pregunta:
¿Se une GTP-γS (GTP gamma S) a todas las proteínas de unión a GTP?
Armacino
2013-02-14 03:53:16 UTC
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Acabo de leer un artículo Rab10 GTPase regula la morfología y la dinámica del ER - Nature Cell Biology 15, 169-178 (2013) doi: 10.1038 / ncb2647. En este trabajo, para identificar proteínas Rab en ER, primero aislaron vesículas ER. Luego se lavó para eliminar las proteínas citosólicas. Después del lavado, estas vesículas se solubilizaron con detergente. Luego, se cargó en una columna de GTP-agarosa (para unir proteínas de unión a GTP a la columna). En el último paso, las proteínas de unión a GTP se eluyeron con GTP y se analizaron mediante SDS-PAGE.

Como control (antes de cargar en la columna) utilizaron GTP gamma S, porque evita que las proteínas de unión a GTP se unan a la columna. Cuando miré su figura; en el carril de control, ¡hay muchas bandas! Así que estoy confundido: (si evita que las proteínas de unión a GTP se unan a la columna, después de eluir de la columna de agarosa GTP, ¿por qué hay bandas? ¿Y cuáles pueden ser estas bandas?)

Si puede agregar un enlace al artículo (es de esperar que sea de acceso abierto), sería útil para interpretar los resultados.
El título de este artículo es '' Rab10 GTPase regula la dinámica y morfología de ER '' Enlace: http://www.nature.com/ncb/journal/v15/n2/full/ncb2647.html Desafortunadamente, no es de acceso abierto. .
Sin embargo, todavía puedo ver las cifras. ¿Sobre cuál tenías la pregunta?
Algo relacionado: http://biology.stackexchange.com/questions/3258/why-is-gtp-gamma-s-non-hydrolyzable
Había leído la respuesta a la pregunta en este enlace. Pero no pude entenderlo exactamente. Entonces, ¿GTP-gamma S se une solo a las GTPasas con mucha fuerza? ¿Es esta la razón?
One responder:
Mad Scientist
2013-02-17 23:48:10 UTC
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Esta es la cifra de la que trata la pregunta. A la derecha está el experimento de control con GTP-γS, a la izquierda sin él:

enter image description here

Las bandas que son visibles en ambos experimentos son de unión inespecífica. Si GTP-γS no afecta su presencia, el mecanismo por el cual se unen a la columna no puede ser específico de la funcionalidad GTPasa.

Las proteínas que buscaban los autores son las que están presentes en la experimentan sin GTP-γS, pero no se eluyen en el experimento con GTP-γS. Estos se unen a través de una funcionalidad GTPasa al GTP en la columna. Están marcados con puntas de flecha en la figura.

La idea general detrás de este experimento de control es distinguir la unión específica de la unión no específica a la columna. Poder hacer eso significa que los autores tenían menos proteínas que necesitaban para investigar más, lo que les ahorra algo de trabajo.



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